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培养基的配制

1)去离子水用蒸馏器进行重新蒸馏(去除无机和有机杂质),制成1000mL三蒸水。三蒸水应及时使用,如果放置一段时间,则使用前须高压处理三蒸水(15MPa20min)。

2)待水温降至15~30℃,加入合成培养基干粉,用磁力搅拌一定时间(2~4h)使之充分溶解。

3)配制RPMI1640培养基时应通入适量CO2加入6mol/L HCIpH6.0左右,这样才能充分溶解。而配制DMEM不需要此步骤。

4)加入一定量NaHCO3调节pH6.9左右。

5)加水至最终体积。

6)打开超净工作台内的紫外消毒灯20min以上。在超净工作台中对溶液进行过滤除菌,分装入100mL50mL无菌玻璃瓶中。

7)瓶口封好,4℃冰箱储存(RPMI1640培养液可以—20℃储存)。

 

【注意事项】

(1)培养细胞使用的瓶子和饭盒应与提取RNA和培养细菌用的瓶子和饭盒严格分开。因为用于处理提取RNADEPC0.2%焦炭酸二乙酯)是一种致癌剂,并可能影响细胞生长。而培养过细菌的用品也不应与培养细胞的混用,以免造成细菌污染。

(2)过滤时过滤泵的压力不要太大,否则使滤膜破裂,起不到除菌的效果。分装时需根据使用量的多少分装于大小合适的瓶子中,分装量为使用3~5次用完为宜,并且每瓶只能装2/3体积的液体,过多时会影响使用或产生污染机会。

(3)培养液过滤后pH可提高0.2~0.3,故在过滤前调节培养液pH6.9左右即可,过滤后达到pH7.1~7.2

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