FISH和PRINS技术2
发布人:管理员 浏览次数: 发布时间:2018-03-20
4. 杂交:
(1)准备探针;
(2)取一个较大的湿盒,交叉放置切片;
(3)滴10 μl 探针在切片的组织上,加盖玻片;
(4)盖上湿盒盖,37℃孵育12~16 h。杂交后水洗:
(5)镊子小心去除盖玻片;
(6)43℃预热杂交后水洗溶液40 ml 水洗切片15 min;
(7)2×SSC(37℃)洗两次,每次10 min;
(8)切片放人染色缸的1×PBS内待检测,勿使切片干燥。
检测:
(9)从1×PBS中取出切片,除去过多的水分,避免标本干燥。把切片放入湿盒内,同时处理4张切片。
(10)每张切片使用30~60 μl 罗丹明抗-地高辛抗体或FITC卵白素,室温下孵育20 min;
(11)去掉塑料盖膜,把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次,每次2 min。
扩增:
(12)从1×PBS中取出切片,斜置切片使液体排出;
(13)每张切片滴30~60 μl 抗-卵白素抗体,加塑料盖膜,室温孵育20 min;
(14)去掉塑料盖膜,把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次,每次2 min;
(15)从1×PBS中取出切片,斜置切片使液体排出;
(16)每张切片滴30~60 μl 抗-卵白素抗体,加塑料盖膜,室温孵育20 min;
(17)1×PBS室温下洗3次,每次2 min。
5. 细胞核染色:
(1)张切片加10~20 μl DAPI,覆盖盖玻片并在室温下孵育2~5 ml;
(1)准备探针;
(2)取一个较大的湿盒,交叉放置切片;
(3)滴10 μl 探针在切片的组织上,加盖玻片;
(4)盖上湿盒盖,37℃孵育12~16 h。杂交后水洗:
(5)镊子小心去除盖玻片;
(6)43℃预热杂交后水洗溶液40 ml 水洗切片15 min;
(7)2×SSC(37℃)洗两次,每次10 min;
(8)切片放人染色缸的1×PBS内待检测,勿使切片干燥。
检测:
(9)从1×PBS中取出切片,除去过多的水分,避免标本干燥。把切片放入湿盒内,同时处理4张切片。
(10)每张切片使用30~60 μl 罗丹明抗-地高辛抗体或FITC卵白素,室温下孵育20 min;
(11)去掉塑料盖膜,把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次,每次2 min。
扩增:
(12)从1×PBS中取出切片,斜置切片使液体排出;
(13)每张切片滴30~60 μl 抗-卵白素抗体,加塑料盖膜,室温孵育20 min;
(14)去掉塑料盖膜,把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次,每次2 min;
(15)从1×PBS中取出切片,斜置切片使液体排出;
(16)每张切片滴30~60 μl 抗-卵白素抗体,加塑料盖膜,室温孵育20 min;
(17)1×PBS室温下洗3次,每次2 min。
5. 细胞核染色:
(1)张切片加10~20 μl DAPI,覆盖盖玻片并在室温下孵育2~5 ml;
(2)尽可能快的在荧光显微镜下观察或封闭盒内保存在-20℃冰箱。切片在染色之后1h内可以在显微镜下观察。(转帖)
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