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核糖核酸酶保护测定(二)

1.  加入适当体积的RNA(<12 μl)+探头(<3 μl)。

 

尝试5和10μg 的RNA加600或800页高辛标记的探针。

 

2.  包括2-3的酵母RNA样品/探针使用。

 

3.  加入20 μl SOLN。 A到所有涡管(FV =30 μl)和自旋向下。

 

4.  孵育90-95℃,5分钟使之变性。冰降速。

 

5.  在42-45'C在干燥的孵化器或水浴孵育O / N。

 

6.  核糖核酸酶消化:稀SOLN。 R在SOLN。 Bx的1:100。每个样品中添加200 μl 。1:300稀释增加66.7 μl 以上的SOLN133.4  μl。 BX。Bx的单独以酵母RNA样品。

 

7.  涡的所有样本,然后降速。

 

8.  孵育在37℃长达30分钟。涡然后停止运转。

 

9.  添加300 μlSOLN。 DX。涡然后停止运转。

 

10.  储存于-20'C15分钟。

来源:丁香通

 

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