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【动物实验】-bcl-2基因修饰神经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤

目的: 讨论bcl-2基因修饰神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤神经功用恢复的影响。

办法: 体外培育大鼠神经干细胞,经Ad-EGFP为载体介导端B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)基因转染神经干细胞,分为3组:对照组、阴性转染组、bcl-2转染组。Western-blot检测神经干细胞在转染前后bcl-2蛋白的表达。成年雌性SD大鼠85只,造模胜利72只,随机分为对照组,NSCs组,bcl-2-NSCs组,24只/组,依照改进的Allen打击法树立大鼠急性脊髓损伤模型。经过BBB评分、斜板实验停止运动功用评定。造模后7 d经过RT-PCR及Western-blot检测检测脊髓损伤区四周HSP27、c-fos基因的表达,TUNEL法检测细胞凋亡状况。造模后4周取材行病理切片HE染色及荧光显微镜观测EGFP标志的NSC存活及散布状况,经过SEP和MEP察看大鼠神经电生理恢复状况。

结果: bcl-2基因转染大鼠神经干细胞后,bcl-2转染组与对照组、阴性转染组相比bcl-2基因和蛋白程度均有表达(P<0.05);大鼠下肢运动功用评价bcl-2-NSCs组优于NSCs组,NSCs组优于对照组。造模后72 h,bcl-2-NSCs组细胞凋亡数均明显低于对照组和NSCs组(P<0.05)。造模后7 d,与对照组和NSCs组相比,bcl-2-NSCs组HSP27基因和蛋白的表达均较显著升高(P<0.05),bcl-2-NSCs组c-fos基因和蛋白的表达较显著降低(P<0.05)。造模后4周,HE染色对照组可见脊髓组织缺失及脊髓空泛构成,无神经轴索经过。NSCs组损伤区可见少量神经轴索样构造,脊髓空泛较小,bcl-2-NSCs组可见较多神经轴索样构造,未见脊髓空泛。EGFP标志的阳性细胞数:bcl-2-NSCs组最多,NSCs组次之,对照组未见,且各组之间差别有显著性(P<0.05)。造模后4周,SEP和MEP的埋伏期:bcl-2-NSCs组<NSCS组<对照组,且各组之间差别有显著性(P<0.05);波幅:bcl-2-nscs组>NSCs组>对照组,且各组之间差别有显著性意义(P<0.05)。

<NSCS组<对照组,且各组之间差别有显著性(结论: 经过Ad-EGFP为载体介导端B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)基因转染使神经干细胞可以促进体外培育的大鼠神经干细胞增殖。bcl-2基因修饰神经干细胞移植可促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生,升高脊髓损伤区HSP27表达,降低脊髓损伤区bcl-2基因的表达和神经细胞凋亡,改善大鼠的肢体运动功用和电生理功用。

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