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细胞冻存与复苏

  

  背景介绍:

  细胞冻存是保存细胞的主要方法之一。低温条件可降低细胞的生命活力、代谢速度和对营养的需求。在0℃以下的冰冻条件下,细胞内生命分子的热运动和化学反应受到了极大地限制,细胞处于代谢最低甚至停滞状态。因此利用冻存技术,将细胞置于-196℃的液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种的危险,起到了细胞保种的作用。
  细胞冻存较难处理的技术环节是细胞通过0℃这一温度点时由于细胞内外的水分结冰造成的冰凌形成,这些冰晶会造成细胞膜和细胞器的破坏并引起细胞死亡。因此,在细胞冻存时向培养液中加入保护剂(甘油或DMSO),可以使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶的形成,可避免细胞损伤。

  采用“慢冻快融”的方法能较好的保证细胞活力的保存。标准冷冻速度开始为-2℃--1℃/min,当温度低于-25℃时可加速降温,到-80℃之后可直接投入液氮(-196℃)内,复苏细胞时则采取突然苏醒的方式,直接将-196℃下装有细胞的冻存管投入37-40℃的热水中迅速化冻。快速地恢复到正常温度,使细胞内外不会形成较大的冰晶,也不会暴露在高浓度溶质的溶液中过长时间。快速复苏使细胞迅速回到正常温度下,恢复其生长和代谢机能。


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