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体外SUMO修饰实验(四)


  4. 带标签的SUMO的制备(以His-SUMO为例)

  (1)培养细胞、诱导及收获。

  (2)每200ml菌液收获的菌体加入5ml His裂解液,重悬沉淀。

  (3)冰浴条件下,超声破碎沉淀。

  (44℃,10000rpm,离心1h

  (5)取上清液,加入Ni-NTA agarose4℃,混合1-2h

  (6)将混合物装柱用His洗涤液洗涤,直到检测不到蛋白浓度。

  (7)His洗脱液进行洗脱,按洗脱次序每管收集500ul

  (8)考马斯亮蓝染色检测蛋白。

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