TRIzol RNA提取试剂盒是由GIBCO BRL公司推出专供提取RNA的产品，其操作方便、快捷。 在TRIzol中，RNA是隔离在RNA 酶污染之外的。而对样品的后续操作会要求用无RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150°C 的烘箱中烘烤4 小时。塑料器皿可以在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。

（一）试剂准备

      1．TRIzol试剂。
      2．氯仿
      3．异丙醇
      4．75%乙醇（DEPC H2O配制）
      5．DEPC H2O

（二）操作步骤

      1． 样品处理：
     （1）培养细胞：收获细胞1-5×107，移入1.5ml离心管中，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。
     （2）组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置５min。
      2．加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。
      3．4℃离心，12000g×15min，取上清。
      4．加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。
      5．4℃离心，12000g×10min，弃上清。
      6．加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。
      7. 晾干，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）。

（三）注意事项

      1．样品量和Trizol的加入量一定要按步骤（1）的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。
      2．实验过程必须严格防止RNsae的污染。

二、总RNA定量

      RNA定量方法与DNA定量相似。RNA在260nm波长处有最大的吸收峰。因此，可以用260nm波长分光测定RNA浓度，OD值为1相当于大约40μg/ml的单链RNA。如用1cm光径，用 ddH2O稀释DNA样品n倍并以ddH2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：
      RNA（mg/ml）=40×OD260读数×稀释倍数(n)/1000

      RNA纯品的OD260/OD280的比值为2.0，故根据OD260/OD280的比值可以估计RNA的纯度。若比值较低，说明有残余蛋白质存在；比值太高，则提示RNA有降解。

此文转载：丁香通