人胚胎干细胞/诱导性多能干细胞(ES/iPS)培养基

      无饲养层细胞 & 周末无需处理细胞

      ReproCELL公司于2003年在日本横滨创立，是日本唯一一家专门从事干细胞培养基研发的公司，引领世界干细胞研究。2005年该公司推出灵长类动物胚胎干细胞培养基，京都大学的山中伸弥学者(Shinya Yamanaka)团队使用该培养基第一个成功培养出诱导多能干细胞，而山中学者本人也因此荣获2012年诺贝尔生理/医学奖。随后，ReproCELL又开发出新型的无饲养层培养基ReproFF2，此培养基用于人ES/iPS细胞培养，与传统的干细胞培养需每天换液不同，ReproFF2培养基一周只需处理细胞三次，可大大节省培养基，降低人力操作成本，无需制备饲养层细胞，周末也无需进行细胞处理，操作简单，只需预热，加入bFGF即可使用。

      产品特性

      • 一周只需处理细胞三次
      • 只需常规培养基用量的一半
      • 周末无需处理细胞
      • 维持干细胞的未分化状态
      • 维持干细胞的分化能力

      干细胞培养推荐时间表
      ReproFF2培养基一周只需处理细胞三次
      在周一和周三进行换液，周五进行传代，周末无需处理。

      无饲养层ReproFF2培养基对干细胞未分化状态的维持

      1 人诱导性多能干细胞(201B7)

      用传代到第10代的干细胞，使用ReproFF2培养基无饲养层培养7天，和传代到第48代的干细胞，饲养层培养3天来验证干细胞未分化的状态。

      1-1 干细胞的形态学观察和碱性磷酸酶活性染色

      形态学观察(图A)和碱性磷酸酶染色(图B)证实人诱导性多能干细胞在无饲养层培养的ReproFF2培养基中保持未分化状态。结果显示，与有饲养层培养的诱导性多能干细胞未分化状态相似(图C和图D)。

      1-2 诱导性多能干细胞中多功能性标志物的表达

      用ReproFF2培养的人诱导性多能干细胞类似于有饲养层培养的干细胞，都能表达干细胞标志物Oct3/4、SSEA-4、TRA-1-60和Nanog。

      1-3使用流式细胞术(FACS) 分析多功能性标志物

      用ReproFF2培养的人诱导性多能干细胞类似于有饲养层培养的细胞，都能表达干细胞标志物Oct3/4、SSEA-4、TRA-1-60和Nanog。

      2 人ES细胞(KhES-1)

      用传代到第10代的干细胞，无饲养层培养7天，和传代到第48代的干细胞，饲养层培养3天来验证人胚胎干细胞的未分化状态。

 
      无饲养层ReproFF2培养基对分化能力的维持

      1分化成心肌细胞

 
      人诱导性多能干细胞经过ReproFF2培养(第一行图片)可以分化为心肌细胞，与有饲养层细胞培养基的结果(第二行图片)类似。如图所示，细胞簇被打散，通过形态学观察和心肌细胞标志物的表达可以确定ReproFF2培养基能够维持干细胞的分化能力。

      2 分化成神经元细胞

      人诱导性多能干细胞经过ReproFF2培养(第一行图片)，形成玫瑰花形结构(rosettes)，分化为多巴胺神经元细胞，与有饲养层细胞培养基的结果(第二行图片)相似。在神经突中也能观察到βⅢ-微管蛋白的表达，同时也可观察到酪氨酸羟化酶与多巴胺生物合成酶的表达以及多巴胺的释放和吸收现象。

此文转载来源：生物通