1、96孔细胞培养 板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次(如为悬浮细胞则用离心洗涤)。

 

一、实验目的

 

1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。

 

2.了解溶血现象及其发生机制。

 

二、实验原理

 

细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。

 

三、实验用品

 

(一) 材料 鸡血细胞

 

(二) 器材 普通显微镜、普通离心机、扭力天平、10ml 试管、10ml 刻度离心管、试管架，2ml 注射器（无需针头）或5ml 移液管、洗耳球、滴管、载玻片、擦镜纸、记号笔等。

 

(三) 试剂

 

1．Alsever 溶液

 

葡萄糖 2.05g

柠檬酸钠 (Na9C6H5O7.2H2O) 0.89g

柠檬酸（C6H 6O7.H2O） 0.05g

氯化钠 0.42g

蒸馏水 100ml

调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，置4℃冰箱保存。

 

2. 0.128 mol/L NaCl 溶液。

 

3． 0.05 mol/L NaCl 溶液。

 

4． 0.4 mol/L NaCl 溶液。

5. 0.128 mol/L NH4Cl 溶液。

 

6. 0.128 mol/L NH4AC 溶液。

 

7. 0.128 mol/L NaNO3溶液。

 

8. 0.32 mol/L 葡萄糖。

 

9. 0.32 mol/L 甘油。

 

10. 0.32 mol/L 乙醇。

 

11. 0.32 mol/L 丙酮。

 

12. 蒸馏水。

 

四、实验操作

 

1．从集市买一只活鸡现杀取血5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s 液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2 周内使用）。

 

2. 使用前，取用Alsever’s 液保存的新鲜鸡血5ml ， 加入8ml 的0.128 mol/L 的 NaCl 溶液，小心混匀，1000 r/min 离心5min，如此3 次洗涤，最后配成30%的鸡红细胞（CRBC）悬液。

 

3. 取 11 支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2 滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及其变化。

 

五、观察结果

 

1. 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（－），镜检红细胞完好呈双凹盘状。

 

2. 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称不完全溶血（＋或＋＋），镜检有部分红细胞呈碎片。

 

3. 如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（＋＋＋），镜检发现细胞全部呈碎片。

 

六、实验建议

 

1. 鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。

 

2. 目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配成30%的红细胞悬液；

 

3. 试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。

 

 

此文转载来源：丁香通