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葡萄糖 -6- 磷酸酶 组织化学 染色法


 
葡萄糖-6-磷酸酶 (glucose-6―phosphatase,G-6―P)定位于肝、肾、肠黏膜的微体及内质网内。主要有两方面的生理功能:一方面通过水解葡萄糖-6-磷酸释放葡萄糖来控制葡萄糖释放人血的量;另一方面,在一定条件下通过其磷酸转移酶活性合成葡萄糖-6-磷酸。糖尿病患者血糖浓度增高的同时,伴有葡萄糖-6-磷酸酶 的磷酸转移酶活性增高,其作用是取代肝内的葡萄糖激酶,使葡萄糖转向糖原合成。
 
铅法:葡萄糖-6-磷酸水解后所释放出磷酸,为硝酸铅所捕获,经硫化铵处理,最终反应产物为颗粒状的硫化铅沉淀。反应通式如下:
 
葡萄糖―6―磷酸钠+H2 O 葡萄糖 -6- 磷酸酶 葡萄糖+磷酸 Pb(NO3 )2 Pb3 (PO4 )2  (NH4 )2 S PbS↓
 
1)孵育液配制(新鲜配制)
0.125%葡萄糖―6―磷酸钠                       4ml
0.2mol/LTris-顺丁烯二酸盐缓冲液(pH 7.4)       4ml
2%Ph(N03 )2 (2.5%)                              0.6ml
蒸馏水                                          1.4ml
充分混合后使用
 
2)染色程序:
①新鲜组织冰冻切片;
②10%福尔马林固定5分钟后水洗;
③切片入孵育液中,37℃孵育20分钟水洗;
④人1%硫化铵水溶液中1分钟水冲洗;
⑤3%福尔马林后固定10分钟;
⑥甘油明胶封固。
 
3)结果:酶活性处显棕色。
 
4)对照实验:①除去底物;②以F―甘油磷酸钠代替底物;③以0.01mol/L氟化钠作为抑制剂。

 

 

                   此文转载:丁香通


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