消化培养法
本法尤适用于培养大量组织，细胞产量高；但用于经常性小量培养工作稍显繁琐，无菌操作不良时且易污染。
实验材料 组织
试剂、试剂盒 Hanks培养液胰蛋白酶
仪器、耗材 吸管平皿培养瓶烧杯搅拌器三角烧瓶不锈钢筛眼科剪眼科镊计数板
实验步骤
1. 准备
取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20 分钟；
2. 布局
点燃酒精灯（或煤气灯），安装吸管帽（应通过火焰）；
3. 处理组织
把组织块置入烧杯中，用Hanks液漂洗2~3 次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60 分钟；
4. 剪切
用眼科剪把组织块切成2~3 毫米大小的块（用手术刀割亦可），以便于消化；加入比组织块总量多30~50 倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞；
5. 消化
或用恒温水浴，或置入37 ℃温箱消化均可，消化中每隔20 分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好（消化前瓶中需置一无菌搅棒）；消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定；
6. 分离
在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块（必要时可继续进行消化）；低速（500~1000 转/分）离心消化液5 分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液（如有其它酶或EDTA 等消化，需用Hanks液洗脱一两次后，再加入培养液）；
7. 计数
用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中；对大多数细胞来说，pH 要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说胆液体变酸，可用NaHCO3调整；
8. 培养
置入36.5 ℃温箱培养；如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽（松口）堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需更换新塞。
注意事项
1. 组织块、胰蛋白酶、培养液等易受紫外线伤害的物品，最好在培养时再携入操作野；如预先置入，需用纸张覆盖，以免受射线影响；开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部（工作时宜挽上袖口）。
组织块培养法
实验材料 组织
试剂、试剂盒 Hanks培养液胰蛋白酶NaHCO3
仪器、耗材 吸管培养瓶烧杯眼科剪眼科镊
实验步骤
1. 剪切
把组织小块（1 cm3）置入小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污，吸净Hanks液，用眼科剪反复剪切成1 mm3块为止；
2. 摆布
用弯头吸管吸取若干小块，置入培养瓶中；用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底上，小块相互距离以0.5 cm 为宜，每一25 ml培养瓶底可摆布20~30 块；
3. 轻轻翻转培养瓶，令瓶底向上；注意翻瓶时勿令组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5 ℃温箱2 小时左右（勿超过4 小时），使小块微干涸；
4. 培养
从温臬中取出培养瓶，开塞，46 度斜持培养瓶（瓶底仍向上），向瓶底角部轻轻注入培养液小许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶底上的组织小块（组织小块附着尚不牢，注意不要把组织块冲走）；置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后，再补加培养液。
其他
一、评价
翻转培养瓶的目的是为使组织块微干涸，以利附和免从瓶壁流失，但时间不宜过长，超过三四小时以上可能对组织有不利影响。
组织块培养法操作简便，顺利情况下，组织小块贴壁培养后24 小时，细胞即可从小块边缘向四周游出，通过生长增殖，最终亦可连接成片；原组织小块可完全散成细胞而消失。如组织块过大，残留小块换液时弃掉或再置另瓶中继续培养。
组织块通过反复剪切可能受一定损伤，并非每块组织都有生长能力，但只要有一部分能生长往往即可形成单层。
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来源：丁香通
