活细胞表面抗原的荧光染色（直接免疫荧光）

实验材料     细胞初始抗体

试剂、试剂盒     PBS 溶液叠氮化钠

实验步骤

1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，轻摇，收获细胞。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。

2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。

3. 计数细胞，每个样品的最小浓度为 1X106/ml。

4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清或 1% 的 PBS 溶液。

5. 加合适滴度的初始抗体，用系列稀释确定合适滴度范围。

6. 在冰上孵育细胞 30 分钟。

7. 在含叠氮化物和 BSA 或热的灭活血清的 4 ml PBS 中洗细胞。

8. 1000 g 离心细胞 5 分钟。

9. 在相近体积的含 0.1% 叠氮化物和 1% BSA 中重悬细胞，终浓度为 1X106~5X106 /ml。

活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光）

实验材料      细胞

试剂、试剂盒      PBS 溶液叠氮化钠

实验步骤

1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，收获细胞。此程序比通常的胰蛋白酶消化时间长。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。操作始终在冰上进行。

2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。

3. 计数细胞，每个样品的最小浓度为 1X106/ml。

4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清的 PBS 溶液。

5. 加合适滴度的初始抗体，用系列稀释确定合适滴度范围。

6. 在冰上孵育细胞 30 分钟。

7. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA，轻轻混合。

8. 1000 g 离心细胞 5 分钟。

9. 用 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA 洗样品。

10. 1000 g 离心细胞 5 分钟。

11. 在适当体积的 PBS+叠氮化钠中重悬细胞。

12. 加合适滴度的次级抗体，用与起始滴度相近的范围确定所需量。

13. 在冰上孵育细胞 30 分钟。

14. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA，轻轻混合。

15. 1000 g 离心细胞 5 分钟。

16. 在相近体积的 PBS+叠氮化钠和 BSA 中重悬细胞，终浓度为 1X106~5X106 /ml。

推荐：方案27.8 原位杂交中的放射自显影技术

来源：丁香通