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流式细胞仪检测A549细胞凋亡三

流式实验步骤  

      收集对数生长期A549细胞,计数,以(15)×105/孔接种于6孔板,置37℃,5CO2条件下培养过夜,使细胞贴壁;次日更换培养液,各孔分别加入含有不同浓度茶氨酸的细胞培养液2 mL/孔,继续常规培养;每24 h同法换液一次;  在药物处理48 h后,以不含EDTA的胰酶消化并收集细胞于流式管1000 r/min离心5 min,弃上清。冷PBS洗涤细胞3次,离心弃上清;  按照Annexin-V-FITC细胞凋亡检测试剂盒的说明,向细胞中加入Binding buffer 150 μL/管和Annexin-V 5 μL/管,振荡混匀。室温、避光反应15 min;  再次加入Binding buffer 100 μL/管和PI染料5 μL/管,振荡混匀; 用流式细胞仪检测细胞凋亡。  


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