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斑点金免疫渗滤测定法(DIGFA)

基本原理

      斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上,改用胶体金标记物代替酶,省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜(NC膜)为载体,将试剂及标本滴加在膜上,通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成,阳性结果在膜上呈红色斑点。


试剂及材料

      1. 渗滤装置:为一塑料小盒(4x3x0.6cm),分为底、盖两层,盖的中央有一个直径0.5cm的小孔。盒底充填吸水性较强的垫料,盖孔下,紧贴垫料放置一片NC膜。紧闭盒盖,即为渗滤装置。在孔中的NC膜上点加1-2ml特异性抗体(一抗)或抗原,室温自然干燥,保存于放干燥剂的密封塑料袋中备用。

      2. 封闭液:含0.2%BSA和0.05%吐温-20的洗涤液。

      3. 洗涤液:50mol/L,pH7.2 PBS。

      4. 特异性抗体(一抗)或抗原

      5. 金标抗体


操作方法

      1. 取出渗滤器,先在小孔的NC膜上,滴加2滴(约100ml)封闭液;

      2. 待其渗入盒内,在NC膜上,加待检标本1滴(约50ml);

      3. 待其渗入盒内,在NC膜上,滴加2滴(约100ml)洗涤液;

      4. 待其渗入盒内,在NC膜上,加金标抗体1滴(约50ml),使其与NC膜上吸附的检品发生反应;

      5. 待其渗入盒内,在NC膜上,滴加2滴(约100ml)洗涤液;

      6. 至洗涤液完全渗入盒内


结果观察

      在小孔NC膜上出现红色反应时为阳性反应,阴性反应不着色。


注意事项

      1. 特异性抗体(一抗)或抗原、待检标本和金标抗体的用量事先都必须应用方阵法确定最适用量。

      2. 盒底充填的垫料吸水性要强,否则影响结果。


此文转载来源:丁香通


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