链亲和素-生物素结合物免疫荧光标记实验
发布人：管理员 浏览次数： 发布时间：2017-03-06
此实验方案介绍了一种经三步反应的技术，它通过使用链亲和素-第二抗体结合物，然后再与生物素-荧光染料结合物反应，提高了免疫组化反应的敏感度。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。
2. 待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片）。
3. 稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每一载玻片上加40~50 μl 抗体，应能盖住切片）。
4. 用与泵相连的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并从另一端加上抗体，盖上加湿盒，室温温育1 h。
5. 以PBS冼玻片3次（5 min/次），从切片一端加入新的PBS缓冲液，由另一端吸去旧的缓冲液。
6. 稀释的生物素酰化第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每一载玻片用40~50 μl抗体）。
8. 以PBS洗玻片3次（毎次洗15 min）加荧光染料-链亲和素于切片上（每一载玻片用40~50 μl 抗体）。置加湿盒中、室温温育1 h，以PBS洗玻片3次。
10. 显微镜下观察 结果，或置玻片盒中贮于4℃。
此文转载：丁香通
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