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新一代细胞转染方法-磁性转染

细胞转染是将外源性分子如DNARNA等导入真核细胞内的专门技术,是研究基因表达调控,突变分析,基因沉默,蛋白质等的工具,目前已成为生物和医学等研究实验室广泛使用的基本技术。理想的转染方法具有转染效率高,对细胞毒性小,使用简便,适用范围广等特点。

 

阳离子脂质体法是目前普遍应用的细胞转染方法,转染效率较高,对细胞有一定毒性,转染效果随细胞类型变化大。对于难以转染的细胞及原代细胞,病毒介导法是可供选择的方法之一,它通过侵染宿主细胞实现转染,可获得较高的转染率。但此方法操作较费力,最适于转染单个克隆的高表达的基因,很多类型的病毒可裂解细胞,要考虑安全因素等。这使得新一代的转染方法-磁性转染,在转染难以转染的细胞及原代细胞时,成为一个新的选择。

 

用于磁性转染的试剂MagnetofectionTM Nature, Cell, PNAS, JBC等很多国际知名杂志发表的文章引用,是一款被多个世界优秀实验室成功使用的成熟的产品。北京启维益成科技有限公司代理的德国Chemicell公司生产的MagnetofectionTM 系列的磁性转染产品和试剂,受到越来越多的国内客户的认可。磁性转染与其他转染方法可以兼容,Chemicell生产的磁性转染试剂CombiMAG可以和任何其他转染方法共同使用,进一步提高转染率。PolyMAG可以作为唯一的转染试剂使用。MagnetofectionTM 为何吸引了如此众多的关注呢?

 

MagnetofectionTM 基于一种新颖、简单且高效的转染培养细胞的方法。它利用磁力将与磁性纳米颗粒结合的基因载体吸向,甚至可能吸入靶细胞。磁性纳米颗粒由表面包被带阳离子的分子的完全可以生物降解的氧化铁制成,能通过盐诱导胶体凝聚和静电作用与核酸和病毒等基因载体结合。加入的载体在几分钟之内即在细胞表面富集,使得100%的细胞与显著剂量的载体接触。 结合的基因载体随后通过胞吞和胞饮进入细胞内,不会在细胞膜上造成穿孔而导致细胞死亡。 按照建议的浓度使用磁性纳米颗粒,进入细胞的磁性纳米颗粒对细胞功能没有影响。

 

这具有以下优点:与标准转染方法相比,极大的提高了转染率。与标准转染方法相比,短时间孵育即可获得提高达几千倍的转基因表达。使用极低剂量的载体即可获得高转染率和高转基因表达水平,节省昂贵的转染试剂。只需极短的处理时间,细胞与基因载体孵育几分钟即足以获得高转染率,而标准方法需几小时。

 

MagnetofectionTM 的使用范围广泛。实验证明,MagnetofectionTM 可以成功转染很多细胞系及难以转染的细胞系,原代细胞等。一种试剂可用于转染多种载体,如核酸和病毒(DNAsiRNA,寡核苷酸,腺病毒,反录病毒等),不需要针对不同类型的载体购买不同的转染试剂。MagnetofectionTM 可用于瞬时转染或稳定转染。

 

MagnetofectionTM 的使用方法极为简单。经过对特定细胞(或细胞系)的转染条件进行优化,确定得到最佳转染率的条件后,即可重复使用优化好的条件转染同一细胞(或细胞系)。要优化的条件包括:转染试剂与核酸或病毒的比例,核酸的量,细胞密度,孵育时间等。基本使用方法是: 用无血清无添加物的培养基或PBS缓冲液稀释核酸或载体,然后加入MagnetofectionTM 混匀。 孵育20-30分钟,然后将混合物加入细胞,并置于特制的专门用于磁性转染的磁板上孵育10-20分钟。

 

使用MagnetofectionTM 不需要很多特殊设备,只需一次性购买专门用于磁性转染的永久磁板即可。

 

与其他转染方法类似,MagnetofectioTM 的转染效率受多种因素的影响。 成功的转染要求:细胞的状况佳,如无支原体污染,解冻后传代次数低,转染时细胞密度适合;核酸的量适合,因为内毒素引起细胞死亡,所以同时要求核酸的纯度高;转染试剂与核酸的比例合适;在磁板上孵育的时间适中等。最佳转染条件对于不同细胞系或细胞可能不同,需要通过优化确定最佳条件。优化后的条件可反复用于转染同一细胞系或细胞。




此文转载来源:丁香通

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